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組織学

ウィスターラットにおいて

Ribeirão Preto 医学部病理学研究室ご提供 – USP

組織学

01

研究
グループ

実験担当者 : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum

N= 29 ウィスターラット
平均体重:421g

動物の由来 : Biotério Central of Campus of Ribeirão Preto of サンパウロ大学
管理 : 実験病理学 リベirão Preto 医学部病理学研究室 – USP
飼育 : ポリプロピレン箱
給餌 : 基本的な飼料と水
照明条件 : 管理された基本条件下の自然な明暗サイクル
実験担当者 : A.Tenenbaum,R.Mené,Kim

病理学部

02

動物の安楽死および組織学的標本

従来型顕微鏡

マウスはCO2チャンバーで安楽死させられました。

  • 23番ブレードで皮膚を切開
  • メッツェンバウム剪刀で前脛部筋を確認して分離
  • メイヨー剪刀で腱を切断。
  • 筋の一部をコルク板に固定
  • 従来の光学顕微鏡研究のために、10%緩衝ホルムアルデヒド溶液および純パラフィン(各々50%)を用いて包埋。
  • 通常の組織学的手順で切片を染色。
  • ミクロトーム 使用機器 : Leika RM 2155
  • 筋切片の染色 は以下で行った

-ヘマトキシリン・エオシン
-マッソン三色染色
-および赤ピクロシリウス.

  • 組織学的検査 は 従来型顕微鏡 (Olympus BH-2)で実施。
  • 偏光ランプ下での観察
  • 写真記録 はLeika DMR顕微鏡にLeika CD 300Fデジタルカメラを接続し、対応PCで行われた。
ミクロトーム

03

材料

6匹/箱
  • 動物は6つの箱に分けられ、1~5番の箱には各5匹、6番の箱には4匹が入っていた 
  • 全ての動物は歩行評価(特殊紙への足跡印影)および後肢を石鹸溶液に浸す前処理が行われた。
  • 箱1対照群で、右前脛筋に0.1 mlの生理食塩水(NaCl 0.9%)を投与された。
  • 箱2〜5のマウスは対照群と同じ筋にEndopeels Original Main Productを0.1 ml投与された。

  • 箱6 は4匹で構成され、それぞれ皮下層にEndopeels original main productを0.5 ml注射された。

  • 全ての動物は各注射の前後に歩行評価を受けた。

ラット用の箱

04

方法

動物は10日後・1か月・3か月・7か月で安楽死させた
安楽死表

05

対照

NaCl 0.5%注射後

コメント : 生理食塩水注射後に特記事項なし

治療なし

L:前脛部-処置なし

R:前脛部-0.1 ml NaCl 0.9% IM注射後

06

Endopeel注射10日後

箱2

右前脛筋に0.1mlのEndopeel注射から10日後。

ここではリンパ球に囲まれた空胞の形成が見られる。 空胞は組織壊死とは異なる 。リンパ球の存在は細胞膜の透過性に関連している。

 

左対照- 100xD10

L : 対照-100xD10

右 100xD10

R:100xD10

右200xx

R :200xD10

右400xxD10

R :400xD10

07

Endopeel注射1か月後

箱3

右前脛筋に0.1mlのEndopeel注射から1か月後。
写真で黒く見えるものは、一部の研究者が想像するような壊死ではありません!
実際、考慮すべき4つの結論があります

  • 染色のアーティファクト
  • 壊死はない
  • アポトーシス
  • 再生過程 
左対照- 100xD30

L : 対照-100xD30

右 100x

R:100xD30

右400xxD30

R :400xD30

08

Endopeel注射3か月後

箱4

右前脛筋に0.1mlのEndopeel注射から3か月(D90)。

左対照- 100xD90

L : 対照-100xD90

右 100x

R:100xD90

09

Endopeel注射7か月後

箱5

右前脛筋に0.1mlのEndopeel筋内注射から7か月(D210)。

7か月後に完全な回復(Restitutio ad integrum)

左対照- 100xD210

L : 対照-100xD210

右 100x

R:100xD210

L Control 50xD210

L :対照 50xD210

R50X-D210

R50X-D210


10

皮下組織へのEndopeel注射

箱6

右前脛部皮下領域に0.5 ml(5×0.1 ml)のEndopeel皮下注射。

L:200x-Control-SC

R-D10-SC-200X

R-D10-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-400X

R-D210-SC-400X


結論
    • Endopeelはおよそ1か月の期間に選択的で可逆的な筋線維融解(myofibrolysis)および炎症反応を誘導する
    • 筋の変化はほぼ完全に可逆的である
    • 筋肉はEndopeel注射にとってより適切な部位であり、より高い有効性・制御性・持続性が得られる
    • 研究全体で壊死や膿瘍は認められなかった。

婦人科学に応用された別の研究

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