Перейти к содержимому

Гистология

На крысах линии Вистар

С любезного предоставления Лаборатории патологии кафедры медицинской школы Рибейран-Прету – USP

гистология

01

Исследовательская
группа

Исследователи : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum

N= 29 крыс Вистар
Средний вес : 421 г

Происхождение животных : Центральный биотерий кампуса Рибейран-Прету Университета Сан-Паулу
Содержание/обслуживание : Экспериментальная патология Лаборатория патологии кафедры медицинской школы Рибейран-Прету – USP
Условия содержания : полипропиленовые ящики
Кормление животных : стандартный лабораторный рацион и вода
Условия освещения : естественные циклы свет/темнота при контролируемых базовых условиях
Исследователи : A.Tenenbaum,R.Mené,Kim

кафедра патологии

02

Усыпление животных и гистологические образцы

Обычная микроскопия

Мышей эутаназировали в камерах с CO2.

  • Разрез кожи лезвием № 23
  • Обнаружение и изоляция претибиальной мышцы с помощью ножниц Метценбаума
  • Пересечение сухожилий ножницами Майо.
  • Фиксация частей мышц на пробковой дощечке
  • Включение с использованием 50% раствора формальдегида - 10% буферизированного и 50% чистого парафина для обычного оптического микроскопического исследования.
  • Окрашивание срезов в рамках рутинного гистологического процесса.
  • Микротом использовался : Leika RM 2155
  • Окрашивание мышечных срезов с

-гематоксилин-эозин
-трихром по Массону
-и красный пикро-сириус.

  • Гистологическое исследование выполняли с помощью обычного оптического микроскопа (Olympus BH-2).
  • Наблюдение под поляризованной лампой
  • Фотодокументация была выполнена с помощью микроскопа Leika DMR, соединённого с цифровой камерой Leika CD 300F и совместимым ПК.
микротом

03

Материал

6 крыс/ящик
  • Животных разделили в 6 ящиков, так что ящики с номерами с 1 по 5 имели по 5 крыс, а ящик номер 6 имел 4 крыс 
  • Все животные были подвергнуты оценке ходьбы посредством отпечатков лап на специальной бумаге, с предварительным погружением задних лап в мыльный раствор. 
  • Ящик 1 содержал контрольную группу, которой вводили 0,1 мл физиологического раствора (NaCl 0,9%) в правую претибиальную мышцу. 
  • Животные из ящиков 2–5 получали 0,1 мл основного продукта Endopeels в ту же мышцу, что и контрольная группа.

  • Ящик 6 состоял из 4 крыс, и каждая получила 0,5 мл основного продукта Endopeels, введённого в подкожный слой. 

  • Все животные проходили оценку ходьбы до и после их соответствующих инъекций.

ящики для крыс

04

Методы

Животные подвергаются эвтаназии через 10 дней-1 месяц- 3 месяца-7 месяцев
таблица эвтаназии

05

Контроль

После введения NaCl 0.5%

Комментарий : Ничего не выявлено после введения физиологического раствора

без лечения

L:Претибиальная-Без лечения

R:Pretibial-After 0.1 ml NaCl 0.9% IM

06

10 days after Endopeel Injection

Ящик 2

10 дней после инъекции Endopeel 0,1 мл в правую претибиальную мышцу.

Здесь можно увидеть образование вакуолей, которые окружены лимфоцитами. Вакуоли отличаются от некроза ткани . Наличие лимфоцитов связано с проницаемостью клеточных мембран.

 

left control- 100xD10

L : Контроль-100xD10

right 100xD10

R:100xD10

правый200xx

R :200xD10

правый400xxD10

R :400xD10

07

1 month after Endopeel Injection

Ящик 3

1 месяц после инъекции Endopeel 0,1 мл в правую претибиальную мышцу.
То, что на фотографиях видно чёрным, не является некрозом, как могли бы предположить некоторые ученые!
Фактически необходимо принять во внимание четыре вывода

  • артефакт окрашивания
  • отсутствие некроза
  • апоптоз
  • биорегенеративный процесс 
left control- 100xD30

L : Контроль-100xD30

right 100x

R:100xD30

правый400xxD30

R :400xD30

08

3 months after Endopeel Injection

Ящик 4

3 месяца (D90) после инъекции Endopeel 0,1 мл в правую претибиальную мышцу.

left control- 100xD90

L : Контроль-100xD90

right 100x

R:100xD90

09

7 months after Endopeel Injection

Ящик 5

7 месяцев (D210) после IM инъекции Endopeel 0,1 мл в правую претибиальную мышцу.

Полное восстановление до первоначального состояния через 7 месяцев

left control- 100xD210

L : Контроль-100xD210

right 100x

R:100xD210

L Контроль 50xD210

L :Контроль 50xD210

R50X-D210

R50X-D210


10

Инъекция Endopeel в подкожную ткань

Ящик 6

0,5 мл ( 5x 0,1ml)  Endopeel подкожная инъекция в правой подкожной претибиальной области.

L:200x-Контроль-SC

R-D10-SC-200X

R-D10-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-400X

R-D210-SC-400X


Выводы
    • Endopeel вызывает селективный обратимый миофибролиз и воспалительную реакцию в течение примерно 1 месяца
    • Мышечные изменения почти полностью обратимы
    • Мышца является лучшим местом для введения Endopeel из-за большей эффективности, контролируемости и продолжительности его действия
    • В течение всего исследования не было обнаружено некроза или абсцесса.

Другое исследование, применённое в гинекологии

Другое исследование