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Istologia

Su ratti Wistar

Per gentile concessione del Laboratorio di Patologia del Dipartimento di Medicina della Scuola di Ribeirão Preto – USP

istologia

01

Studio
Gruppo

Sperimentatori : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum

N= 29 ratti Wistar
Peso medio : 421g

Origine degli animali : Biotério Central del Campus di Ribeirão Preto della Università di São Paulo
Manutenzione : Patologia Sperimentale Laboratorio del Dipartimento di Patologia della Scuola di Medicina di Ribeirão Preto – USP
Alloggio degli animali : gabbie in polipropilene
Alimentazione degli animali : dieta di base del laboratorio e acqua
Condizioni di luce : cicli naturali luce/buio in condizioni di base controllate
Sperimentatori : A.Tenenbaum,R.Mené,Kim

dipartimento di patologia

02

Sacrificio degli animali e campioni istologici

Microscopia convenzionale

I topi sono stati eutanizzati in camere a CO2.

  • Incisione della pelle con una lama n° 23
  • Individuazione e isolamento del muscolo pretibiale usando forbici Metzenbaum
  • Sezionamento dei tendini con forbici Mayo.
  • Fissazione di porzioni dei muscoli su sezioni di sughero
  • Inclusione utilizzando soluzione formolo al 50% - 10% tamponata e 50% di paraffina pura per lo studio microscopico ottico convenzionale.
  • Colorazione delle sezioni come processo istologico di routine.
  • Microtome usato : Leika RM 2155
  • Colorazione delle sezioni muscolari con

-ematossilina-eosina
-tricromia di Masson
-e picro-sirius rosso.

  • Esame istologico è stato effettuato con un microscopio convenzionale (Olympus BH-2).
  • Osservazione con lampada polarizzante
  • Documentazione fotografica è stata effettuata con un microscopio Leika DMR collegato a una fotocamera digitale Leika CD 300F e a un PC compatibile.
microtomo

03

Materiale

6 ratti/gabbia
  • Gli animali sono stati divisi in 6 gabbie, in modo che le gabbie da 1 a 5 avevano 5 ratti e la gabbia numero 6 aveva 4 ratti 
  • Tutti gli animali sono stati sottoposti a una valutazione della deambulazione tramite impronte su carta speciale, con precedente immersione delle zampe posteriori in una soluzione di sapone. 
  • Gabbia 1 aveva il gruppo di controllo, che ha ricevuto l'applicazione di 0,1 ml di soluzione salina ( NaCl 0,9%) sul muscolo pretibiale destro. 
  • I topi delle gabbie 2 a 5 hanno ricevuto 0,1 ml di Endopeels Original Main Product sullo stesso muscolo del gruppo di controllo.

  • Gabbia 6 era costituita da 4 ratti, e ciascuno ha ricevuto 0,5 ml del prodotto principale Endopeels Original iniettato nel tessuto sottocutaneo. 

  • Tutti gli animali sono stati sottoposti a valutazione della deambulazione prima e dopo le rispettive iniezioni.

gabbie per ratti

04

Metodi

Gli animali vengono sacrificati dopo 10 giorni-1 mese-3 mesi-7 mesi
tabella del sacrificio

05

Controllo

Dopo l'iniezione di NaCl 0.5%

Commento : Nulla da segnalare dopo l'iniezione della soluzione salina

senza trattamento

L:Pretibiale-Nessun trattamento

R:Pretibiale-Dopo 0.1 ml NaCl 0.9% IM

06

10 giorni dopo l'iniezione di Endopeel

Gabbia 2

10 giorni dopo l'iniezione di Endopeel 0.1ml nel muscolo pretibiale destro.

Qui si può osservare la formazione delle vacuoli che sono circondate da linfociti. Le vacuoli sono diverse dalla necrosi tissutale . La presenza di linfociti è legata alla permeabilità delle membrane cellulari.

 

controllo sinistro- 100xD10

L : Controllo-100xD10

destro 100xD10

R:100xD10

destro200xx

R :200xD10

destro400xxD10

R :400xD10

07

1 mese dopo l'iniezione di Endopeel

Gabbia 3

1 mese dopo l'iniezione di Endopeel 0.1ml nel muscolo pretibiale destro.
Ciò che si vede in nero nelle immagini non è una necrosi come potrebbero immaginare alcuni scienziati!
Infatti, devono essere considerate 4 conclusioni

  • un artefatto della colorazione
  • assenza di necrosi
  • apoptosi
  • un processo biorigenerativo 
controllo sinistro- 100xD30

L : Controllo-100xD30

destro 100x

R:100xD30

destro400xxD30

R :400xD30

08

3 mesi dopo l'iniezione di Endopeel

Gabbia 4

3 mesi (D90) dopo l'iniezione di Endopeel 0.1ml nel muscolo pretibiale destro.

controllo sinistro- 100xD90

L : Controllo-100xD90

destro 100x

R:100xD90

09

7 mesi dopo l'iniezione di Endopeel

Gabbia 5

7 mesi (D210) dopo l'iniezione IM di Endopeel 0.1ml nel muscolo pretibiale destro.

Restitutio ad integrum completa dopo 7 mesi

controllo sinistro- 100xD210

L : Controllo-100xD210

destro 100x

R:100xD210

L Controllo 50xD210

L :Controllo 50xD210

R50X-D210

R50X-D210


10

Iniezione di Endopeel nel tessuto sottocutaneo

Gabbia 6

0.5 ml ( 5x 0.1ml)  Iniezione SC di Endopeel nella regione pretibiale sottocutanea destra.

L:200x-Controllo-SC

R-D10-SC-200X

R-D10-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-400X

R-D210-SC-400X


conclusioni
    • Endopeel induce una miofibrolisi selettiva e reversibile e una reazione infiammatoria per un periodo di circa 1 mese, approssimativamente
    • I cambiamenti muscolari sono reversibili nella quasi totalità
    • Il muscolo è il luogo migliore per iniettare Endopeel per maggiore efficacia, controllo e durata della sua azione
    • Non sono state riscontrate necrosi né ascessi durante lo studio.

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