Étude expérimentale

Évaluation des altérations musculaires après l'application intramusculaire d'ENDOPEEL

Les auteurs ont étudié l'altération de la démarche et la réaction tissulaire du muscle ayant reçu une injection d'Endopeel.
Nous avons choisi d'injecter Endopeel dans le muscle pré-tibial des rats et d'étudier les altérations histologiques.
Le choix du muscle pré-tibial des rats a été fait en raison de sa similitude de poids avec le muscle abaisseur de l'angle de la bouche chez l'homme.

Objectif : Étudier le phénomène biologique causé par l'injection d'Endopeel dans le muscle pré-tibial du rat Wistar et évaluer les altérations de sa démarche et les altérations histopathologiques du muscle traité.

Auteurs

Auteurs principaux :
-Dr.Alain Tenenbaum
-Sr.Mauro Tiziani
Tomas Yung Joon Kim
Romulo Mené

En savoir plus sur les auteurs principaux

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Study
d'étude

Expérimentateurs : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum,M.Tiziani

N= 29 rats Wistar
Poids moyen : 421g

Origine des animaux : Biotério Central du campus de Ribeirão Preto de l'Université de São Paulo
Entretien : Pathologie expérimentale Laboratoire du département de pathologie de la faculté de médecine de Ribeirão Preto – USP
Hébergement des animaux : caisses en polypropylène
Alimentation des animaux : régime de base du laboratoire et eau
Conditions d'éclairage : cycles naturels jour/nuit sous conditions de base contrôlées
Expérimentateurs : A.Tenenbaum,R.Mené,M.Kim,M.Tiziani

02

Sacrifice des animaux et échantillons histologiques

Microscopie conventionnelle

Les souris ont été euthanasiées dans des chambres à CO2.

Incision de la peau avec une lame n° 23
Repérage et isolation du muscle pré-tibial à l'aide de ciseaux Metzenbaum
Section des tendons avec des ciseaux Mayo.
Fixation des portions de muscle sur des morceaux de liège
Inclusion en utilisant une solution de formaldéhyde à 50% - 10% tamponnée et 50% de paraffine pure pour l'étude microscopique optique conventionnelle.
Coloration des coupes selon le procédé histologique de routine.
Microtome utilisé : Leika RM 2155
Coloration des coupes musculaires avec

-hématoxyline-éosine
-trichrome de Masson
-et picro-sirius rouge.

Examen histologique réalisé avec un microscope conventionnel (Olympus BH2)
Observation sous lampe polarisée
Documentation photographique réalisée avec un Leika DMR associé à une caméra numérique Leika CD 300F et un PC compatible.

03

Matériel

6 rats/boîte

Les animaux ont été répartis dans 6 boîtes, de sorte que les boîtes numérotées de 1 à 5 contenaient 5 rats et la boîte numéro 6 en contenait 4
Tous les animaux ont subi une évaluation de la marche par empreintes plantaires sur du papier spécial, après immersion préalable des pattes postérieures dans une solution savonneuse.
Boîte 1 contenait le groupe témoin, qui a reçu l'application de 0,1 ml de solution saline (NaCl 0,9%) sur le muscle pré-tibial droit.
Les souris des boîtes 2 à 5 ont reçu 0,1 ml du produit principal Endopeel Original sur le même muscle que le groupe témoin.
Boîte 6 était constituée de 4 rats, et chacun a reçu 0,5 ml du produit principal Endopeel Original injecté dans le tissu sous-cutané.
Tous les animaux ont été soumis à une évaluation de la marche avant et après leurs injections respectives.

04

Méthodes

Les animaux sont sacrifiés après 10 jours-1 mois- 3 mois-7 mois

Évaluation de la démarche

Pour enregistrer les empreintes plantaires des rats, des bandes de papier mesurant 43 cm de long sur 8,7 cm de large, dimensions considérées comme adaptées pour le « catwalk » des rats et réalisées selon le dessin de DE MEDINACELI; FREED; WYATT (1982), ont été utilisées. Le papier avait été préalablement trempé dans une solution de bromophénol bleu.

Pour la préparation du papier, le bromophénol bleu sous forme anhydre (Sigma) a été dilué à 1% dans de l'acétone absolue, acquérant une couleur orange.
Les feuilles de papier ont été trempées dans cette solution et placées au soleil pour sécher, puis elles ont été découpées en bandes et conservées dans des emballages plastiques, afin d'éviter l'humidité, qui pourrait altérer la couleur bleue.

Les animaux ont été amenés à marcher sur le couloir recouvert des bandes de papier préparées, les pattes postérieures ayant été imprégnées d'une solution de détergent neutre, ce qui change immédiatement la couleur de l'empreinte du jaune au bleu. Les empreintes restent sur les bandes de papier, qui ont été laissées à sécher pour la lecture des mesures nécessaires au calcul de l'Indice Fonctionnel Sciatique.
Par la suite, celles-ci ont été analysées par un programme informatique (software) développé par SELLI (1998), pour obtenir l'Indice Fonctionnel Sciatique proposé par BAIN; MACKINNON; HUNTER (1989), qui prend en compte la longueur de l'empreinte, l'écartement total des orteils entre le 1er et le 4e orteil, et les orteils intermédiaires qui sont le 2e et le 3e. Les empreintes de chaque animal ont été obtenues avant l'application d'Endopeel, comme contrôle, immédiatement après l'injection d'Endopeel, puis de nouveau, à intervalles périodiques, lorsque les animaux ont été sacrifiés pour l'extraction du muscle tibial antérieur pour étude histologique.

Les empreintes ont été numérisées avec un scanner et importées dans le programme SELLI, qui permet la capture, l'identification et l'analyse des images, permettant l'application d'autres méthodes d'identification de l'Indice Fonctionnel Sciatique (DE MEDINACELI, FREED & WYATT, 1982; DE MEDINACELI, DERENZO & WYATT, 1984; CARLTON & GOLDBERG, 1986), ainsi que des indices de fonctionnalité du tibia et du nerf péronier (BAIN; MACKINNON & HUNTER, 1989). Une fois l'empreinte affichée sur le moniteur, ses paramètres sont analysés et mesurés, ce qui nécessite le positionnement du curseur et des clics dans la séquence prédéterminée correcte. Le programme calcule ensuite et fournit la valeur de l'indice, qui est également stockée dans l'ordinateur.

Empreintes de la souris sans aucune injection

Empreintes de la souris après injection de 0,05 ml dans le muscle pré-tibial droit

Calcul et mesure de l'Indice Fonctionnel Sciatique (SFI)

Représentation schématique des mesures réalisées pour calculer l'Indice Fonctionnel Sciatique.

E : Expérimental (pied opéré) ;

N : Normal (pied opposé) ;

TS : Ouverture totale des orteils (1er au 5e) ;

IT : Ouverture des orteils intermédiaires (2e au 4e) ;

PL : Longueur de l'empreinte

Programme utilisé pour mesurer l'Indice Fonctionnel Sciatique (SFI)

Analyse de la démarche

Conclusions sur la démarche

NaCl 0,9%, 0,1 ml dans le muscle pré-tibial n'altère pas la démarche.
Endopeel à 0,1 ml injecté intramusculairement dans le pré-tibial affecte la démarche de manière marquée immédiatement après l'application et de façon modérée après 10 à 30 jours.
L'altération de la démarche causée par Endopeel diminue avec le temps lorsqu'il est appliqué par voie intramusculaire, à ce niveau de concentration.
L'application dans le tissu sous-cutané n'est pas aussi efficace que l'injection intramusculaire.
Lorsque 0,5 ml est appliqué dans le tissu sous-cutané (région du muscle pré-tibial) il y a une perte progressive de la démarche, probablement en raison de la diffusion lente d'Endopeel du tissu sous-cutané vers le tissu intramusculaire.