Deneysel Çalışma

ENDOPEEL'ün intramüsküler uygulamasını takiben kaslardaki değişikliklerin değerlendirilmesi

Yazarlar, endopeel enjeksiyonu uygulanmış kasın yürüyüşündeki değişikliği ve doku reaksiyonunu incelediler.
Endopeel'i sıçanların pre-tibial kasına uygulamayı ve histolojik değişiklikleri çalışmayı seçtik.
Sıçanların pre-tibial kasının seçilmesi, ağırlık bakımından insanlardaki ağız köşesi depresör kasına benzerliği nedeniyle yapıldı.

Amaç : Wister sıçanının pre-tibial kasına yapılan endopeel enjeksiyonunun neden olduğu biyolojik olguyu incelemek ve yürüyüşündeki değişiklikleri ile uygulanan kastaki histopatolojik değişiklikleri değerlendirmek.

Yazarlar

Ana Yazarlar :
-Dr. Alain Tenenbaum
-Sr. Mauro Tiziani
Tomas Yung Joon Kim
Romulo Mené

Ana Yazarlar Hakkında Daha Fazla Oku

01

Çalışma
Grubu

Deneyciler : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum,M.Tiziani

N= 29 Wistar sıçanı
Ortalama ağırlık : 421g

Hayvanların kökeni : São Paulo Üniversitesi Ribeirão Preto Kampüsü Biotério Central
Bakım : Deneysel Patoloji Ribeirão Preto Tıp Fakültesi Patoloji Anabilim Dalı Laboratuvarı – USP
Hayvanların barındırılması : polipropilen kutular
Hayvanların beslenmesi : laboratuvarın temel diyeti ve su
Işık koşulları : kontrollü temel koşullarda doğal aydınlık/karanlık döngüleri
Deneyciler : A.Tenenbaum,R.Mené,M.Kim,M.Tiziani

02

Hayvanların Eginilmesi & Histolojik Numuneler

Konvansiyonel Mikroskopi

Sıçanlar CO2 odalarında ötenazi edildiler.

23 numaralı bisturi ile cilt kesisi
Metzenbaum makasları kullanılarak pretibial kasın bulunması ve izole edilmesi
Mayo makası ile tendonların kesilmesi.
Kork kabuğu parçalarına kas bölümlerinin tespiti
Konvansiyonel optik mikroskopik çalışma için %50 formaldehit çözeltisi - %10 tamponlu ve %50 saf parafin ile gömme.
Kesitlerin rutin histolojik süreç olarak boyanması.
Mikrotom kullanılan : Leika RM 2155
Kas dilimlerinin boyanması ile

-hematoksilin-eozin
-Masson trikrom
-ve kırmızı pikrosirius.

Histolojik inceleme konvansiyonel mikroskop (Olympus BH2) ile gerçekleştirildi
Polarize lamba altında gözlem
Fotoğrafik dokümantasyon Leika DMR mikroskobu ile, Leika CD 300F dijital kamera ve uyumlu PC'ye bağlanarak gerçekleştirildi.

03

Materyal

6 sıçan/kutu

Hayvanlar 6 kutuya bölündü; böylece 1'den 5'e kadar olan kutularda 5 sıçan ve 6 numaralı kutuda 4 sıçan vardı
Tüm hayvanlar, özel kağıt üzerine ayak izi izlenimi ile yürüyüş değerlendirmesine tabi tutuldu ve arka bacaklar önceden sabun çözeltisine daldırıldı.
Kutu 1, sağ pretibial kasa 0,1 ml salin çözeltisi (NaCl %0,9) uygulayan kontrol grubu'nu içeriyordu.
2'den 5'e kadar olan kutulardaki sıçanlara kontrol grubuyla aynı kas bölgesine 0,1 ml Endopeels Orijinal Ana Ürün uygulandı.
Kutu 6, 4 sıçandan oluşturuldu ve her birine subkutan tabakaya 0,5 ml Endopeels orijinal ana ürün enjekte edildi.
Tüm hayvanlar, kendi enjeksiyonlarından önce ve sonra yürüyüş değerlendirmesine tabi tutuldu.

04

Yöntemler

Hayvanlar 10 gün-1 ay-3 ay-7 ay sonra egine edildi

Yürüyüş Değerlendirmesi

Sıçanların ayak izlerini kaydetmek için, 43 cm uzunluğunda ve 8,7 cm genişliğinde kağıt şeritleri kullanıldı; bu boyutlar sıçanların 'yürüyüş yolu' için uygun kabul edilir ve DE MEDINACELI; FREED; WYATT (1982) çizimine göre hazırlandı. Kağıt önceden bromofenol mavisi çözeltisine batırıldı.

Kağıdın hazırlanması için anhidrik (Sigma) bromofenol mavisi, mutlak aseton içinde %1 oranında seyreltilerek turuncu bir renk aldı.
Kağıt yaprakları bu çözeltiye batırıldı ve kurutmak için güneşe kondu, ardından şeritlere kesildi ve nemden etkilenmemesi için plastik paketlerde saklandı; aksi halde mavi renk değişebilirdi.

Hayvanlar, arka bacakları nötr deterjan çözeltisine batırılmış halde önceden hazırlanmış kağıt şeritleri kaplı yürüyüş yolunda yürütüldü; bu durum ayak izinin rengini hemen sarıdan maviye çevirdi. Ayak izleri, gerekli ölçümlerin Sciatic Functional Index'i (Siyatik Fonksiyon İndeksi) hesaplamak için alınması amacıyla kağıt şeritlerde kaldı ve kurutulmaya bırakıldı.
Daha sonra bu veriler, SELLI (1998) tarafından geliştirilen bir bilgisayar programı (yazılım) ile analiz edildi; BAIN; MACKINNON; HUNTER (1989) tarafından önerilen Sciatic Functional Index'i elde etmek için, basitçe baskı uzunluğu, 1. ile 4. parmak arasındaki toplam parmak açıklığı ve ara parmaklar olan 2. ile 3. parmak açıklığı dikkate alındı. Her hayvanın ayak izleri endopeel uygulamasından önce kontrol olarak, uygulamayı takiben hemen ve daha sonra periyodik aralıklarla elde edildi; hayvanlar histolojik çalışma için anterior tibia kasının çıkarılması amacıyla ecel edildiğinde de alındı.

Ayak izleri bir tarayıcı ile dijitalleştirildi ve görüntülerin yakalanmasını, tanımlanmasını ve analizini sağlayan SELLI programına aktarıldı; bu program Sciatic Functional Index'in diğer tanımlama yöntemlerinin uygulanmasına izin veriyor (DE MEDINACELI, FREED & WYATT, 1982; DE MEDINACELI, DERENZO & WYATT, 1984; CARLTON & GOLDBERG, 1986) ve ayrıca Tibia Fonksiyonellik indeksleri ile peroneal sinir için indeksleri (BAIN; MACKINNON & HUNTER, 1989). Ayak izi monitörde gösterildiğinde, parametreleri analiz edilir ve ölçülür; bunun için imlecin doğru önceden belirlenmiş sırayla tıklanması gerekir. Program daha sonra indeksi hesaplar ve değeri verir; bu ayrıca bilgisayarda saklanır.

Hiçbir enjeksiyon yapılmamış farenin ayak izleri

Sağ pre-tibial kasına 0,05 ml enjeksiyon sonrası farenin ayak izleri

Sciatic Functional Index veya SFI Hesaplaması & Ölçümü

Sciatic Functional Index'i hesaplamak için yapılan ölçümlerin şematik gösterimi.

E: Deneysel (operasyona uğramış ayak);

N: Normal (karşı ayak);

TS: Parmakların toplam açılımı (1. ile 5.);

IT: Ara parmakların açılımı (2. ile 4.);

PL: Adım uzunluğu

Sciatic Functional Index SFI'yi ölçmek için kullanılan program

Yürüyüş Analizi

Yürüyüş Sonuçları

%0,9 NaCl, 0,1 ml pretibial kas içine uygulandığında yürüyüşü etkilemez.
Endopeel 0,1 ml intramüsküler olarak pretibial uygulandığında yürüyüşü özellikle uygulamadan hemen sonra ve 10 ila 30 gün arasında orta derecede etkiler.
Endopeel'in intramüsküler uygulamada neden olduğu yürüyüşteki değişiklik, bu konsantrasyon düzeyinde zamanla azalmaktadır.
Subkutan dokuya uygulama, intramüsküler kadar etkili değildir.
Subkutan dokuya 0,5 ml uygulandığında (pretibial kas bölgesi) yürüyüşte ilerleyici kayıp görülür; muhtemelen Endopeel'in subkutan dokudan intramüsküler dokuya yavaş difüzyonundan kaynaklanmaktadır.